http://hdl.handle.net/10174/254 2026-04-05T20:50:13Z http://hdl.handle.net/10174/40634 Title: Validação, por PCR quantitativo, da expressão aumentada de genes no nemátode da madeira do pinheiro (NMP) em resposta ao silenciamento de proteínas zinc finger. Authors: Rodrigues, Eduarda Abstract: As proteínas zinc finger estão entre as proteínas mais abundantes nos genomas eucarióticos. Muitas destas proteínas são fatores de transcrição (FT) que reconhecem e ligam-se a sequências específicas do DNA, exercendo uma função da regulação da expressão genética. Estudos anteriores de RNAseq revelaram uma expressão elevada destes FT durante a infeção da planta com o nemátode fitoparasita Bursaphelenchus xylophilus (causador da doença da murchidão do pinheiro). A expressão destes FT foi silenciada no nemátode e pretende-se agora com esta proposta de estágio validar a expressão de genes que se prevê diminuída como consequência do silenciamento dos FT. Pretende-se igualmente identificar as vias metabólicas nas quais estes genes participam. As técnicas laboratoriais a realizar incluem: isolamento de DNA, PCR convencional, eletroforese em gel de agarose, síntese de cDNA, PCR quantitativo (real time PCR). A análise da expressão relativa por RT-qPCR demonstrou uma redução significativa na expressão dos genes BXY262000 e BXY47000, com diminuições de aproximadamente 35 e 14 vezes, respetivamente, após o silenciamento do fator de transcrição. Estes resultados indicam que ambos os genes podem ser regulados positivamente pelo zinc finger C2H2. 2025-06-30T23:00:00Z http://hdl.handle.net/10174/37960 Title: Caracterização molecular e filogenética de nemátodes fitoparasitas e das suas bactérias endossimbiontes Authors: Andrónico, Ricardo Abstract: Os nemátodes fitoparasitas são organismos vermiformes microscópicos, que parasitam plantas, causando danos às culturas agrícolas. Estes organismos invertebrados pertencem ao filo Nematoda e são conhecidos pela sua capacidade de penetrar nas raízes das plantas, alimentando-se de células vegetais e causando sintomas de doenças nas plantas hospedeiras. Da família Longidoridae, os nemátodes do género Xiphinema Cobb, 1913 são nemátodes fitoparasitas com capacidade de transmitir vírus às plantas, representando uma preocupação significativa para a agricultura devido aos danos que podem causar às culturas e aos desafios associados ao seu controlo. A importância dos endossimbiontes, como por exemplo, “Candidatus Xiphinematobacter”, reside na sua influência biológica e patogenicidade dos nemátodes hospedeiros, além de afetarem potencialmente a eficiência das estratégias de controlo biológico. O primeiro passo para estabelecer medidas de controlo contra esses nemátodes é a sua correta identificação taxonómica (ao nível de espécie). A presença de endossimbiontes dos géneros “Candidatus Xiphinematobacter” está associada ao Xiphinema spp. Em Portugal, a identificação destes não é ainda conhecida. Com base nesta problemática, este trabalho apresenta como principal objetivo a caracterização molecular e filogenética dos nemátodes fitoparasitas do género Xiphinema e respetivas bactérias endossimbiontes através da amplificação de marcadores ribossomais (28S rRNA para o nemátode, e 16S rRNA para bactérias) e mitocondrial (gene COI mtRNA). Espera-se que a caracterização molecular e filogenética dos nemátodes fitoparasitas e dos seus endossimbiontes, permita desenvolver estratégias promissoras para o seu controlo. 2024-06-30T23:00:00Z http://hdl.handle.net/10174/37958 Title: Avaliação da capacidade de degradação de xenobióticos do nemátode fitoparasita Pratylenchus penetrans Authors: Ratado, Joana Abstract: O nemátode das lesões radiculares Pratylenchus penetrans é um endoparasita migratório capaz de infetar várias culturas agrícolas sendo, por isso, considerado um dos mais destrutivos a nível mundial. Atualmente, os pesticidas químicos são a principal metodologia utilizada no controlo dos danos causados por estes fitoparasitas. No entanto, e devido aos problemas associados a esta abordagem de proteção, tornou-se fundamental a procura de sistemas alternativos mais ecológicos que permitam combater esta espécie altamente ameaçadora. Os óleos essenciais de plantas e os compostos bioativos isolados mostraram ter ação nematodicida sendo, portanto, eficientes no controlo deste fitoparasita. Neste sentido, o principal objetivo deste trabalho consiste em avaliar dois compostos orgânicos, nomeadamente o 3-octanol e o benzaldeído, e a sua capacidade de degradação de xenobióticos no nemátode P. penetrans. Posteriormente, e para efeitos comparativos, foi avaliada a ação do nematodicida oxamil, princípio ativo de um produto comercial, no metabolismo do nemátode. Para isso, foram realizadas várias tarefas recorrendo a diversas metodologias em que consistem na: i) análise in silico de genes envolvidos no metabolismo dos xenobióticos, selecionados a partir do transcriptoma do P. penetrans na presença de 3- octanol, benzaldeído e oxamil; ii) validação no genoma e transcriptoma dos genes preditos do P. penetrans no metabolismo dos xenobióticos; e iii) estudo da expressão dos genes selecionados no metabolismo dos xenobióticos na presença dos três compostos orgânicos. Os resultados obtidos contribuirão beneficamente para este estudo do modo de ação destes dois compostos no P. penetrans. 2024-06-30T23:00:00Z http://hdl.handle.net/10174/37926 Title: Análise de expressão de genes do nemátode fitoparasita, Bursaphelenchus xylophilus em resposta ao composto benzaldeído. Authors: Portalegre, Sónia Abstract: O setor florestal, que assume um papel essencial a nível económico no país, é fortemente afetado por pragas. A doença da murchidão do pinheiro, causada pelo nemátode da madeira do pinheiro (NMP), Bursaphelenchus xylophilus, é responsável por elevadas perdas económicas e ambientais a nível mundial. Em Portugal, o controlo desta doença é essencial de forma a minimizar os danos causados. Existem várias estratégias de controlo, sendo comum a utilização de tratamentos químicos que, apesar de alguma eficácia, apresentam toxicidade para os ecossistemas. Novas alternativas mais sustentáveis têm surgido para o controlo da doença, como a utilização dos óleos essenciais de plantas, que mostraram ter um efeito nematodicida mais eficaz. Um composto orgânico, benzaldeído (C7H6O), mostrou ter uma eficácia significativa na mortalidade do NMP. Neste sentido, pretende-se com este trabalho avaliar a expressão diferencial de genes no NMP em resposta à ação do composto benzaldeído (C7H6O), assim como, compreender quais as vias metabólicas associadas a essa resposta. No presente estudo, uma lista de 8 genes candidatos previamente identificados foram caracterizados e validados através da análise in silico e amplificação por PCR. A análise da expressão relativa dos genes em resposta ao benzaldeído mostrou que diferentes genes que codificam proteínas da via metabólica dos xenobióticos são altamente expressos quando comparados com o controlo. 2024-06-30T23:00:00Z